PKA-PINK1/Parkin信号通路在氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠皮质星形胶质细胞凋亡和焦亡中的作用

作者：于红; 马美娜; 周真真; 郭庆夺; 于红美

来源：河北医科大学学报, 2021, 42(02): 129-171.

• 凋亡
• 焦亡
• 蛋白激酶类

目的评价蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)-PTEN诱导性激酶蛋白1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)/E3泛素连接酶(E3 ubiquitin ligases, Parkin)信号通路在氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠皮质星形胶质细胞凋亡和焦亡中的作用。方法体外培养SD新生大鼠原代皮质星形胶质细胞,将细胞接种于6孔板或96孔板,根据随机数字表法将星形胶质细胞分为4组(n=42):对照组(C组)、氧糖剥夺组(oxygen-glucose deprivation,OGD/R组),H89+氧糖剥夺(H89+OGD/R, HO组),H89对照组(H组),H89为PKA特异性抑制剂。采用无糖培养基在无氧条件下(95%N2和5%CO2的混合气体内)孵育6 h,再放置在含有5%CO2的正常环境下培养24 h的方法制备氧糖剥夺/复氧复糖损伤模型,HO组和H组在氧糖剥夺前1 h向培养基内加入H89 10μmol/L, C组和H组PBS洗涤后置于含有5%CO2的正常培养箱中培养。根据上述各组处理后,采用膜联蛋白(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞凋亡率,采用半胱天冬酶-1裂解片段(cleaved caspase-1)/PI免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞焦亡率,采用四甲基偶氮唑法测定细胞存活率,采用Fluo-3/AM免疫荧光法测定细胞内钙离子浓度,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量,酶联免疫吸附法检测PKA活性,蛋白免疫印迹法法检测PINK1和Parkin的表达。结果与C组比较,OGD/R组和HO组皮质星形胶质细胞的凋亡率和焦亡率、细胞内游离钙离子浓度、ROS含量、PKA活性、PINK1和Parkin表达升高,细胞存活率下降(P<0.05);与OGD/R组比较,HO组皮质星形胶质细胞的凋亡率和焦亡率、细胞内游离钙离子浓度、ROS含量、PKA活性PINK1和Parkin表达下降,细胞存活率升高(P<0.05);C组与H组以上各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制PKA-PINK/Parkin信号通路过度活化能够减轻氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠星形胶质细胞凋亡和焦亡。

• 单位
  沧州市中心医院