猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：张太翔; 凌宗帅; 岳志芹; 徐彪; 梁成珠; 刘文鹏; 张焕海; 张艺兵

来源：中国畜牧兽医, 2012, (06): 181-184.

• 猪流感病毒
• 实时荧光定量PCR
• TaqMan探针 SIV
• real-time quantitative RT-PCR
• TaqMan probe

本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×108至2.0×102拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。