体外转录法制备生物素随机标记的BCG小RNA探针的应用

作者：吴金银; 吴桐; 张凤民; 赵吉子^*

来源：国际遗传学杂志, 2018, 41(05): 330-334.

• 体外转录
• 生物素随机标记
• sRNA探针
• 诺瑟杂交
• 斑点杂交

目的制备生物素随机标记的卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)小RNA(small RNA,sRNA)探针,用于BCG sRNA的验证。方法以BCG的sRNA-ASdes为目的基因,构建ASdes的克隆质粒pMD18-T/ASdes,经T7 RNA聚合酶体外转录,获得生物素随机标记的ASdes (3’T7) bio-RNA探针,利用诺瑟杂交(Northern blot)和斑点杂交(Dot blot)验证该探针的敏感性。结果以ASdes (3’T7) bio-RNA为探针,当BCG总RNA为7μg时,可用Northern blot检测到阳性信号。结论体外转录获得的生物素随机标记ASdes(3’T7)bio-RNA探针的敏感性较好,可广泛应用于Northern blot检测sRNA。

• 单位
  哈尔滨医科大学