小鼠EVL基因的克隆和真核表达载体的构建

作者：邹海; 韩骅; 高方; 曹秀丽; 徐骁

来源：现代生物医学进展, 2012, (24): 4606-4610.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2012.24.001

• EVL蛋白
• 基因克隆
• 真核表达 EVL protein
• Gene cloning
• Eukaryotic expression

目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础。方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD-18T载体中,测序鉴定正确。用BamH I和HincII双酶切,定向克隆EVL编码区片段到真核表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒正确后。将重组质粒转染入HELA细胞中,以RT-PCR检测EVL的mRNA的表达,以Western Blot检测EVL蛋白的表达。结果:酶切鉴定结果显示小鼠EVL编码区基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1中;RT-PCR和We...

• 单位
  第四军医大学