人角膜基质透镜长期超低温保存的可行性评估

作者：韦琦; 丁辉; 钟探; 余瀚洋; 杨镇朵; 范红明; 何林艺; 钟兴武^*

来源：中华实验眼科杂志, 2021, 39(12): 1031-1037.

DOI：10.3760/cma.j.cn115989-20210413-00249

• 角膜疾病
• 角膜移植
• 角膜基质
• 生物保存
• 低温贮藏
• 超微结构
• 凋亡
• 透明度

目的观察超低温环境下长期保存后人角膜基质透镜的透明度及结构变化, 探讨简单可行且有效的角膜基质透镜长期保存方案。方法收集2013—2020年于中山大学中山眼科中心海南眼科医院行飞秒激光小切口角膜透镜取出术(SMILE)200眼, 手术中获取完整人角膜基质透镜标本200份。将人角膜基质透镜标本置于-80 ℃超低温冰箱中保存, 按照保存时间的不同将标本分为1个月组、24个月组、60个月组和84个月组, 每组50份。采用超微量分光光度计测量各组在300～800 nm波长范围内角膜基质透镜的透光率, 每个透镜共连续检测10次, 每次间隔50 nm;分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察各组角膜基质透镜的组织学形态变化和胶原纤维结构改变;采用透射电子显微镜观察各组角膜基质透镜中胶原纤维排列方式及角膜基质细胞的超微结构变化;采用TUNEL染色法检测各组人角膜基质透镜中角膜基质细胞凋亡情况。结果各组450～800 nm波长范围内角膜基质透镜透光率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。Masson染色结果显示, 1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列整齐、紧密, 24个月组部分胶原纤维间出现空泡, 60个月组胶原纤维排列疏松, 空泡增多, 84个月组部分胶原纤维脱落, 角膜基质透镜变薄;苏木精-伊红染色显示角膜基质透镜形态改变与胶原纤维变化相对应。透射电子显微镜下可见1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列规则, 角膜基质细胞呈长梭形, 核膜完整, 胞质丰富;24个月组胶原纤维排列稍疏松, 角膜基质细胞变形, 核膜不完整;60个月组胶原纤维排列疏松、不整齐, 细胞核萎缩变形;84个月组胶原纤维排列紊乱, 角膜基质细胞皱缩, 核膜不连续, 核质裂解。TUNEL染色结果显示, 1个月组、24个月组、60个月组和84个月组透镜中基质细胞凋亡率分别为(87.80±1.17)%、(89.50±1.05)%、(89.30±1.51)%和(90.20±1.47)%, 总体比较差异无统计学意义(F=4.525, P=0.053)。结论人角膜基质透镜超低温环境下保存84个月可见胶原纤维排列紊乱及角膜基质细胞凋亡, 但其透明度和完整性仍较好。超低温保存技术长期保存角膜基质透镜有效且简单可行。

• 单位
  眼科学国家重点实验室; 中山大学中山眼科中心; 中山大学; 中山眼科中心海南眼科医院