粉尘螨变应原第5组分单克隆抗体的制备与鉴定

作者：李启松; 孙金霞; 杨李; 马桂芳; 张承伯; 俞黎黎; 崔玉宝

来源：现代免疫学, 2018, 38(01): 8-12.

• Der f 5
• 粉尘螨
• 单克隆抗体
• 特性鉴定

本研究制备并鉴定了鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。将质粒pET28a(+)-Der f 5转化ArcticExpress(DE3)感受态细胞,取单个菌落接种培养,加入IPTG诱导表达,经纯化获得Der f 5重组蛋白。利用Der f 5重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏细胞与其骨髓瘤细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌抗体的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。通过间接ELISA、Western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。最终获得3株稳定分泌鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的高效价单克隆抗体。研究分析表明该3株单抗均能识别重组Der f 5蛋白和天然的粉尘螨提取物。本实验成功制备了3株鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der f 5检测及纯化方法奠定了基础。

• 单位
  无锡市人民医院; 中心实验室; 无锡人民医院; 南京医科大学; 江苏医药职业学院