人BRCA1干涉慢病毒载体的构建与验证

作者：张永平; 赵虎; 韦伊芳; **; 药立波

来源：现代生物医学进展, 2012, (17): 3201-3204.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2012.17.035

• BRCA1
• 慢病毒载体
• 干涉
• 重组质粒 BRCA1
• Lentiviral vector
• Interference
• Recombinant plasmid

目的:设计合成干涉BRCA1表达的小干扰RNA,并克隆入pLKO.1慢病毒表达载体,为研究基因BRCA1在乳腺癌细胞增殖中的作用提供基础。方法:根据人BRCA1的基因序列,设计合成三对BRCA1干涉片段(序列前后加入酶切位点EcoRI和AgeI),再利用酶切连接反应将其插入到慢病毒载体pLKO.1中,经过酶切鉴定及测序正确后,将重组质粒转染入MCF-7细胞,48h后提取蛋白质和RNA,通过蛋白印迹验证BRCA1的蛋白水平的表达情况,Realtime PCR验证BRCA1的RNA水平的表达变化。结果:重组质粒经酶切鉴定和测序比对完全正确,转染乳腺癌细胞48h后可见BRCA1表达的明显下调。结论:...

• 单位
  第四军医大学