胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及rAAV_2/eGFP转染的研究

作者：张喜梅; 郭筠秋; 金连弘

来源：解剖学报, 2007, (05): 610-613.

• 皮肤
• 干细胞
• 免疫细胞化学
• 基因转染
• 大鼠

目的对表皮干细胞(ESCs)进行分离培养和鉴定,利用携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV)转染表皮干细胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的转染效率。方法1.获取胎鼠表皮单细胞悬液。2.利用层黏连蛋白(laminin)和Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)筛选ESCs,在体外进行培养和鉴定。3.将ESCs按5×104个/孔接种入24孔培养板中,按照不同的病毒基因数与转染细胞数之比(MOI)加入所需rAAV2/eGFP病毒,计数绿色荧光细胞数目,并计算转染效率。结果1.ESCs对Laminin和CollagenⅣ的吸附性很好,克隆形成率较高。2.对ESCs进行β1整合素(Integrinβ1)单抗、角蛋白19(Keration 19,K19)单抗的免疫细胞化学染色,均呈阳性表达。3.利用rAAV/eGFP病毒体外转染ESCs,可稳定表达eGFP。结论用Laminin和CollagenⅣ快速黏附法可从胎鼠皮肤分离和富集ESCs。

• 单位
  哈尔滨医科大学