2种核酸快提取法对羊口疮病毒和羊痘病毒DNA提取效能的比对研究

作者：谭小雨; 杨洋; 郭紫晶; 李彦敏; 张志东^*

来源：畜禽业, 2023, 34(05): 1-9.

DOI：10.19567/j.cnki.1008-0414.2023.05.001

• 快速核酸提取试剂
• 羊口疮
• 羊痘
• qPCR
• RPA-LFD

目的 合理选择病毒快速核酸提取方法。方法 分别采用2种商品化核酸快提取法——Cell-to-cDNA裂解液(A法)和基于磁珠核酸提取方法(InnuPREP MP Basic Kit A,B法),提取羊临床样品中的羊口疮病毒(ORFV)和羊痘病毒(CaPV)核酸，使用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)和重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术(RPA-LFD)方法进行平行检测，并与常规核酸提取方法(宝生物病毒DNA/RNA提取试剂盒，C法)比较。结果 与C法相比，在A法和B法提取的46份疑似orf拭子中，qPCR的ORFV核酸检出率分别为70.8%和87.5%,RPA-LFD的检出率分别为69.5%和82.6%;在A法和B法提取的52份疑似CaP的拭子样品中，qPCR的CaPV核酸检出率分别为77%和90%,RPA-LFD的检出率分别为65.5%和89.7%。对组织样品分析发现：A法不能用于组织样品的核酸提取；在B法提取的52份疑似orf组织样品核酸中，与C法相比，qPCR的ORFV核酸检出率为93.7%,RPA-LFD的检出率93.3%;对B法提取的61份疑似CaP组织样品核酸中，qPCR的CaPV核酸检出率为94.5%,RPA-LFD的检出率为88.7%。结论 磁珠核酸提取方法(B法)可适用于不同样品中的ORFV和CaPV核酸的快速提取。

• 单位
  西南民族大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所