Treg中条件性Notch2基因敲除小鼠的构建及鉴定

作者：谯月龙; 焦沃尔; 邓玉琴; 孙柳; 续珊; 杨蕊; 陶泽璋; 陈始明^*

来源：华南国防医学杂志, 2021, 35(04): 240-261.

DOI：10.13730/j.issn.1009-2595.2021.04.002

• 调节性T细胞
• Notch2基因
• 条件性基因敲除小鼠
• 基因型
• 造模
• 自身免疫性疾病

目的繁育和鉴定调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)中条件性Notch2基因敲除小鼠,为Notch2在Treg中的功能提供研究工具;为Treg与免疫性疾病的发病关系及靶向治疗提供研究手段。方法将引进的Notch2flox/flox小鼠和Foxp3-Cre+小鼠进行饲养和杂交;将繁育得到的第一代小鼠进行相互交配,再得到第二代小鼠。通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)鉴定出具有Notch2flox/floxFoxp3-Cre+基因型的小鼠,再通过该小鼠进行繁育。通过流式细胞术分选出野生型小鼠和Notch2flox/floxFoxp3-Cre+小鼠体内的Treg, Western blot检测小鼠Treg中Foxp3、Notch2、NICD2蛋白的表达,苏木精-伊红(hemotoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠肺脏等器官的形态学变化。结果该方法成功构建了在Treg中敲除Notch2基因的小鼠。Western blot结果显示Notch2flox/flox Foxp3-Cre+小鼠体内的Treg中Notch2、NICD2、Foxp3蛋白表达明显下降(P<0.05),HE染色显示该小鼠肺脏等器官出现明显炎症细胞浸润。结论本研究成功构建了Treg中条件性敲除Notch2基因的实验小鼠,为Treg与免疫性疾病的发病和靶向干预研究奠定了基础。

• 单位
  武汉大学人民医院