犬冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：侯凯文; 刘婉宁; 王金涛^*; 郑家三^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (18): 85-88.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.08.0316

• 犬冠状病毒
• 荧光定量RT-PCR
• 引物
• 探针
• 3′UTR基因

为了建立犬冠状病毒(CCoV)的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法，试验通过分析比对NCBI下载的犬冠状病毒(CCoV)全基因组序列，在其3′UTR保守区设计一对特异性引物及TaqMan探针，经反应条件优化，建立CCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用建立的检测方法检测CCoV标准品，绘制标准曲线，检测建立方法的特异性、敏感性和重复性，并对临床样品进行检测，且与普通RT-PCR检测结果进行比较，计算符合率。结果表明：标准曲线方程为y=3.25x+10.84,相关系数为0.996 4,在2.61×101～2.61×108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。除CCoV检测结果为阳性外，犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒和犬副流感病毒检测结果均为阴性；检测下限为2.61×101拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%。建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检出阳性临床样品9份，而普通RT-PCR检出阳性临床样品5份，两种检测方法的符合率为91.66%。说明建立的CCoV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可用于犬冠状病毒病的临床检测。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 动物科技学院