车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

作者：苏学思; 张玉宝^*; 王若愚; 王亚军; 唐国亮; 金卫杰

来源：浙江农业学报, 2021, 33(01): 104-111.

• 百合
• 车前草花叶病毒
• 衣壳蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7%～100%,氨基酸序列相似性达到83.6%～100%;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异。SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku。Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量。本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考。

• 单位
  中国科学院西北生态环境资源研究院; 中国科学院大学