脯氨酸氨肽酶枯草芽孢杆菌分泌表达及特性表征

作者：汪克红; 王开道; 田亚平^*

来源：食品与生物技术学报, 2018, 37(11): 1135-1140.

• 脯氨酸氨肽酶
• 枯草芽孢杆菌
• 分泌表达
• 特性表征

构建重组枯草芽孢杆菌大量分泌米曲霉脯氨酸氨肽酶,纯化后对其基本酶学性质进行表征。将脯氨酸氨肽酶cDNA序列从载体pMD19-pap上克隆后连接到载体pMA5上得到重组质粒,转化枯草芽孢杆菌WB600后进行分泌表达。通过在培养基中加入5%D-山梨醇和2 mmol/L CaCl2,胞外酶活由7.5 U/mL提高到36 U/mL。通过硫酸铵盐析、Hitrap Q和SuperdexTM75对重组脯氨酸氨肽酶进行了纯化,纯化后的比酶活为247.3 U/mg,纯化倍数达到8.8倍。该酶最适温度为50℃,最适pH为7.5,米氏常数Km和最大反应速率Vmax分别为0.171 mmol/L和55.99μmol/(L·min)。

• 单位
  江南大学; 工业生物技术教育部重点实验室