Vibrio natriegens几丁质酶基因的异源表达及酶学性质研究

作者：张巧; 李永成^*

来源：食品科技, 2022, 47(02): 10-17.

DOI：10.13684/j.cnki.spkj.2022.02.046

• 几丁质酶
• 克隆表达
• 酶学性质
• 几丁寡糖

几丁质是自然界中除纤维素外第二多的多糖聚合物，在几丁质酶的作用下生成的几丁寡糖具有较好的生物活性及应用价值。通过分子生物学手段获得高活性重组几丁质酶，有利于实现虾壳等几丁质资源的高值化利用。对来源于Vibrio natriegens中的几丁质酶基因进行克隆及诱导表达，获得重组几丁质酶VnChit4，然后通过亲和层析对该酶进行纯化，并测定其酶学性质及酶解产物。结果表明，VnChit4纯酶液的酶活力为2.66 U/mL，最适温度和最适pH值分别为50 ℃、pH7.0。在低于40 ℃、pH6～9范围内保持较好的稳定性；Ca2+、Fe2+、Co2+对重组酶VnChit4的活力有促进作用，Mn2+、Ni+、Cu2+和EDTA对该酶有抑制作用。以胶体几丁质为底物时，VnChit4的米氏常数Km值为2.82 mg/mL，最大反应速率Vmax为6.56 g/min·L。该酶对几丁质、虾壳粉、几丁四糖、几丁五糖和几丁六糖也表现出一定的水解作用，酶解产物主要为几丁二糖，是一种内切几丁质酶。该研究构建的重组几丁质酶表现出较好的酶活性，对其酶学性质的研究，有利于该几丁质酶的开发及虾壳几丁质的高值化利用。

• 单位
  贺州学院; 海南大学