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摘要
目的建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和Taq Man荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测。方法以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及Taq Man FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和Taq Man荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性。结果普通PCR和Taq Man荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为100 copies/μl和1.0×105cfu/g,Taq Man荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33copies/μl和1.0×104cfu/g;Taq Man荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,Taq Man荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15%0.98%,组间差异为0.55%1.63%。结论本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和Taq Man荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测。
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单位传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
