肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的161位赖氨酸存在小泛素化修饰

作者：郝晓波; 卢红艳^*; 朱玥; 万峰云; 万雪晴

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2019, 35(02): 158-161.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008778

• CCAAT增强子结合蛋白α
• SUMO
• 蛋白相互作用
• 肺泡Ⅱ型上皮细胞

目的明确人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)能否发生小泛素相关修饰物(SUMO)修饰,并进一步鉴定其修饰位点。方法采用免疫荧光双标法检测C/EBPα和SUMO1在人AECⅡ中的表达情况。免疫共沉淀(Co-IP)检测C/EBPα和SUMO1在AECⅡ中的相互作用,明确人AECⅡ中C/EBPα能否发生SUMO化修饰。利用SUMOsp软件预测人C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα上第161位赖氨酸(即K161),构建野生型GFP-C/EBPα质粒和突变型GFP-K161R质粒并转染AECⅡ,采用Co-IP鉴定C/EBPα的SUMO化位点。结果免疫荧光双标发现AECⅡ中SUMO1和C/EBPα存在共定位现象,且主要定位于细胞核中; C/EBPα和SUMO1的Co-IP结果出现C/EBPα-SUMO条带,提示C/EBPα能与SUMO1相互作用。野生型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,可检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,而突变型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,不能检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,提示C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。结论人AECⅡ中C/EBPα能发生SUMO化修饰且其修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。

• 单位
  江苏大学附属医院