Pfu DNA聚合酶的表达条件优化及纯化研究

作者：欧阳乐军^*; 李莉梅; 布梁灏; 刘雅丽; 柳镜炬; 黄嘉玲; 蔡治全; 赵俊仁; 倪燕妹; 黄明超

来源：基因组学与应用生物学, 2019, 38(12): 5458-5464.

DOI：10.13417/j.gab.038.005458

• 高保真
• DNA聚合酶
• 热变性
• PCR反应

Pfu DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的高保真DNA聚合酶之一。本研究对重组菌株的Pfu酶基因表达条件进行优化,以提高Pfu DNA聚合酶的表达效率。通过在菌液深度OD600=0.87时加入1.5 mmol/L的IPTG进行诱导培养,诱导培养时间为11.03 h,用酶溶法对重组菌株进行破胞提取粗酶液,经热变性法与盐析沉淀法对杂酶进行纯化,最后经过透析后得到纯酶。采用考马斯亮蓝G-250法对酶进行含量测定及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,最后使用PCR反应检测提纯后的Pfu酶的活性。结果表明优化处理后制备的Pfu DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Pfu DNA聚合酶水平。本研究为Pfu DNA聚合酶的开发和利用奠定了基础。

• 单位
  广东农垦热带作物科学研究所; 广东石油化工学院