易错PCR法提高L-氨基酸脱氨酶全细胞转化L-异亮氨酸生产α-酮-β-甲基正戊酸效率

作者：郭濛檬; 刘龙; 李江华; 堵国成^*; 陈坚

来源：食品与生物技术学报, 2018, 37(11): 1173-1180.

DOI：10.3969/j.issn.1673-1689.2018.11.009

• L-氨基酸脱氨酶
• 易错PCR
• 全细胞转化
• α-酮-β-甲基正戊酸

对奇异变形杆菌Proteus mirabilis中的L-氨基酸脱氨酶进行定向进化,利用易错PCR技术向基因中引入随机突变,建立突变文库来筛选可获得较高α-酮-β-甲基正戊酸产量的突变株。突变株7/23-6最适全细胞转化反应条件是以pH 8.5 Tris-HCl为缓冲液,用900 mmol/L L-异亮氨酸在30℃下进行催化反应21～24 h,其α-酮-β-甲基正戊酸产量可以达到102 g/L,底物转化率达到87%。与对照菌相比,α-酮-β-甲基正戊酸产量和底物转化率均提高了13%,热稳定性提高了36.7%。

• 单位
  生物工程学院; 江南大学