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摘要
为了建立一种快速、灵敏、特异的水禽圆环病毒检测方法，试验根据GenBank中已公布的鸭圆环病毒(DuCV)和鹅圆环病毒(GoCV)的Rep基因序列设计3条特异性引物，对扩增条件进行优化，并检验优化后方法的特异性和灵敏性，最后用建立的水禽圆环病毒巢式PCR检测方法对40份疑似水禽圆环病毒感染的病料进行检测。结果表明：水禽圆环病毒巢式PCR方法可成功扩增出719 bp和543 bp的目的片段；优化后的一轮、二轮PCR中退火温度分别为50,56℃,引物加入量均为0.6μL,二轮PCR的模板稀释倍数为1×103倍。优化后的方法对水禽圆环病毒的检测具有较好的特异性，与鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、H5N6亚型禽流感病毒(AIV)、H9N2 AIV、新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DEV)、鹅细小病毒(GPV)及鹅星状病毒(GoAstV)均无交叉反应；该方法的最低检出限达4.04×102拷贝/μL,分别是一轮、二轮PCR最低检出限的1×104,1×103倍；利用该方法对肝脏病料进行检测，GoCV的阳性率为60%(12/20),DuCV的阳性率为40%(8/20)。说明试验建立的巢式PCR检测方法可用于水禽圆环病毒的检测。
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