耐砷A216T错义突变型PML-RARα质粒的构建及雄黄对其蛋白产物影响及机制

作者：潘一鸣; 李蕊白; 黄子明; 刘宇; 费明明; 陈凌燕; 侯丽^*

来源：中国医药导报, 2021, 18(33): 16-20.

• 质粒构建
• 雄黄
• 急性早幼粒细胞白血病
• 砷剂耐药
• 自噬

目的构建PMLA216T-RARα过表达质粒,并研究雄黄对其蛋白产物的影响及机制。方法通过资料库及文献获得PML、RARα的mRNA序列,以及PML-RARα的融合位点。设计引物后,通过聚合酶链反应获得目的片段,通过无缝克隆技术连接两个片段,插入突变,并与载体质粒相连接,测序验证。转染质粒至HL-60细胞,血清饥饿法处理24 h后用Western blot观察PML-RARα、p-mTOR、p62、LC3B水平变化;不同浓度的雄黄处理24 h后,用Western blot观察PML-RARα、p-mTOR、p62、LC3B水平变化。结果测序结果显示质粒构建成功,序列符合预期设计。1、2、4、8μmol/L雄黄处理后PMLWT-RARα和PMLA216T-RARα水平低于未经雄黄处理(0μmol/L)的PMLWT-RARα和PMLA216T-RARα水平,差异有统计学意义(P <0.05);0.5μmol/L雄黄处理后PMLWT-RARα水平低于未经雄黄处理的PMLWT-RARα水平,差异有统计学意义(P <0.05)。相同浓度雄黄处理后PMLA216T-RARα水平高于PMLWT-RARα水平,差异有统计学意义(P <0.05)。5%FBS和未经FBS处理的PMLA216T-RARα、p-mTOR水平低于10%FBS处理的PMLA216T-RARα、p-mTOR水平,p62、LC3B水平高于10%FBS处理的PMLA216T-RARα水平,差异有统计学意义(P <0.05)。4、8、16、32、64μmol/L雄黄处理后PMLA216T-RARα水平低于未经雄黄处理的PMLA216T-RARα水平,差异有统计学意义(P <0.05);8、16、32、64μmol/L雄黄处理后p-mTOR、p62水平低于未经雄黄处理的p-mTOR、p62水平,LC3B水平高于未经雄黄处理的LC3B水平,差异有统计学意义(P <0.05);16μmol/L雄黄处理后p-mTOR、p62水平低于8μmol/L雄黄处理后的p-mTOR、p62水平,LC3B水平高于8μmol/L雄黄处理后的LC3B水平,差异有统计学意义(P <0.05)。结论错义突变型PMLA216T-RARα过表达质粒构建成功,高浓度雄黄可能通过选择性自噬下调PMLA216T-RARα。

• 单位
  北京中医药大学东直门医院; 生命科学学院; 温州医科大学