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摘要
以猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3,PCV3）Cap蛋白为模式抗原，探索病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中高效表达的方法。体外构建多拷贝毕赤酵母表达载体，转入GS115感受态细胞后获得含有1、2、4、8拷贝目的基因的毕赤酵母菌株。对上述酵母菌株进行摇瓶发酵，利用SDS-PAGE、Western blot和灰度分析等方法检测目的蛋白表达情况。消除GS-8CAP菌株博来霉素（Zeocin）抗性后获得抗生素敏感型菌株（GS-8CAP-ZeoS）,向该菌株中继续转入8拷贝酵母表达质粒从而获得GS-16CAP菌株，评估GS-16CAP的目的蛋白产量。结果显示：GS-8CAP菌株目的蛋白产量与GS-1CAP相比提高487.6%;GS-16CAP菌株目的蛋白产量是GS-8CAP的1.64倍，是GS-1CAP的9.47倍；通过与梯度稀释的牛血清白蛋白（BSA）进行蛋白条带比较，评估GS-16CAP菌株目的蛋白产量约为113 mg/L。研究表明，多拷贝技术能够有效提高Cap蛋白在毕赤酵母中的产量。本研究将为毕赤酵母高效表达其他病毒衣壳蛋白提供重要参考，并为PCV3亚单位疫苗的开发奠定基础。
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