转录因子NbNAC062及其纳米药物对PVY侵染的抑制作用

作者：曲潇玲; 宋丽云^*; 张道顺; 丁程瀛; 沈广材; 张友臣; 张晓亮; 焦裕冰; 李莹; 杨金广; 申莉莉^*

来源：中国烟草科学, 2023, 44(02): 35-42.

DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2023.02.006

• NbNAC062
• 马铃薯Y病毒
• 敲除
• 过表达
• HACC-NbNAC062纳米药物

前期研究表明NbNAC062能够抑制PVY早期侵染，本研究通过构建NbNAC062敲除突变体和过表达植株进一步明确NbNAC062的抗病毒功能，并利用异硫氰酸荧光素（fluorescein-5-isothiocyanate,FITC）标记的壳聚糖季铵盐（chitosan quaternaryammoniumsalt,HACC）包被NbNAC062质粒，制备HACC-NbNAC062纳米药物。激光共聚焦显微镜对纳米药物进行示踪；透射电镜和激光粒子分析仪对其表征进行分析。通过GFP荧光差异、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测病毒含量来探明纳米药物对PVY侵染的影响。结果显示，敲除组病毒GFP荧光增强，而过表达组病毒GFP荧光减弱，PVY CP含量与上述结果一致。纳米药物粒径集中分布在18～32 nm之间；Zeta电位为+41.8 mV。浸润纳米药物HACC-NbNAC062后48 h，在细胞内观察到FITC-HACC（绿色荧光）与RFP-NbNAC062（红色荧光）；接种PVY-GFP后5、7、9 d,NbNAC062-HACC施药组的PVY CP mRNA水平较对照组分别下调17.41%、47.81%、13.03%；第7天施药组PVY CP蛋白水平明显低于对照组，病毒荧光强度显著暗于对照组。上述研究结果说明HACC-NbNAC062纳米药物成功递送了NbNAC062，并发挥了其对PVY初期侵染的抑制作用。

• 单位
  长江大学; 中国农业科学院烟草研究所; 云南省烟草公司保山市公司