登革病毒铁蛋白纳米颗粒抗原的表达与纯化

作者：鲍君铎; 冯生; 高岩; 张佳奇; 汪伟; 李霄; 李楠; 金鑫^*; 金宁一^*; 鲁会军^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(12): 1365-1374.

DOI：10.13350/j.cjpb.231201

• 登革病毒
• 铁蛋白
• 原核表达
• 纳米颗粒

目的 登革病毒(Dengue virus, DENV)在世界范围流行。在我国，登革病毒流行毒株不断发生变化，登革病毒不断变异以及外来输入病例给登革热的预防和控制带来巨大挑战，开发安全有效的疫苗对于该病的预防控制至关重要。本研究将登革病毒包膜蛋白(envelope protein, E)呈递在幽门螺旋杆菌铁蛋白上以形成纳米颗粒，建立一种以铁蛋白纳米颗粒为载体的登革疫苗，表达登革病毒铁蛋白纳米颗粒抗原并进行纯化，以期为新型登革疫苗的研究提供借鉴。方法 以质粒pcDNA3.1-DENV2-E-FE为模板扩增得到FE、DENV2-E-FE基因。将目的基因片段通过同源重组的方式分别连接到原核表达载体pET30a上，构建重组质粒pET30a-FE和pET30a-E-FE,经双酶切和测序鉴定后转化入感受态细胞中进行诱导表达，得到重组蛋白，通过SDS-PAGE、非还原性SDS-PAGE、Western blot及透射电镜对目的蛋白表征进行分析鉴定。结果 成功扩增出目的基因片段，构建的重组质粒pET30a-FE和pET30a-E-FE转化到感受态细胞后经诱导表达约26 ku和71 ku的可溶性目的蛋白。Western blot检测重组蛋白能被相应抗体识别，透射电镜观察到两种蛋白均可自组装成粒径约13 nm和70 nm的颗粒结构。结论 通过大肠埃希菌成功表达可溶性铁蛋白和登革病毒包膜蛋白铁蛋白，两种蛋白均具有反应原性且均能自组装形成纳米结构，可为新型登革纳米颗粒疫苗的研制提供借鉴。

• 单位
  吉林农业大学; 延边大学; 中国农业科学院; 温州大学