甲型副伤寒沙门菌h1a-spaO融合基因构建及其表达产物免疫保护作用

作者：金蕾; 蒋锦琴; 方佳琪; 林旭瑷; 严杰; 孙爱华

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2014, 34(09): 702-706.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.09.010

• 甲型副伤寒沙门菌
• h1a-spaO融合基因
• 重组表达
• 免疫原性
• 免疫保护性

目的构建甲型副伤寒沙门菌h1a-spaO融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rH1a-SpaO免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接引物PCR构建并扩增h1a与spaO基因的融合基因h1a-spaO,T-A克隆后测序。采用常规基因工程方法构建h1a-spaO融合基因原核表达系统,SDS-PAGE检测其rH1a-SpaO表达情况。采用Western blot鉴定rH1a-SpaO抗原性和免疫反应性,微量肥达试验确定rH1a-SpaO抗血清凝集甲型副伤寒沙门菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1aSpaO对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的保护作用并与等量单一重组表达蛋白H1a(rH1a)及SpaO(rSpaO)比较。结果所构建的h1a-spaO融合基因与单一h1a或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。h1a-spaO融合基因原核表达系统能高效表达rH1a-SpaO。rH1a-SpaO能与rH1a或rSpaO抗血清结合,rH1a-SpaO抗血清也能识别rH1a和rSpaO并经H抗原凝集甲型副伤寒沙门菌。100μg rH1a-SpaO对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率(93.3%)明显高于等量rH1a(60.0%)及rSpaO(53.3%)(P<0.05)。结论重组融合蛋白抗原rH1a-SpaO免疫保护作用较等量单一rH1a或rSpaO更强,可作为甲型副伤寒两价基因工程疫苗或伤寒/副伤寒荚膜多糖-蛋白结合疫苗的有效抗原。

• 单位
  杭州医学院; 浙江大学