大鼠神经元型一氧化氮合酶基因慢病毒载体的构建及功能测定

作者：朱贤慧; 张蕾; 杜紫薇; 徐楚; 孙楠; 周亚萍; 张宇^*; 周其冈^*

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2019, 39(06): 841-845+861.

DOI：10.7655/NYDXBNS20190610

• 神经元型一氧化氮合酶
• 慢病毒
• 神经干细胞
• 一氧化氮

目的:构建编码大鼠神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)全长基因的慢病毒载体,并检测其表达效率和催化活性功能。方法:采用RT-PCR提取nNOS的cDNA,同时改造真核表达载体pCDH-GFP。鉴定nNOS的cDNA碱基序列正确后,将目的基因克隆入慢病毒载体pCDH-GFP,得重组载体pCDH-GFP/nNOS,采用Lipofectamine 2000将其及慢病毒包装辅助质粒转染293T细胞,超速离心纯化后,感染神经干细胞和海马齿状回神经元进行感染能力鉴定,并检测nNOS蛋白表达和催化功能。结果:成功构建编码nNOS全长cDNA,测序证明重组慢病毒载体pCDH-GFP/nNOS构建成功。包装慢病毒颗粒LV-nNOS-GFP可以感染离体神经干细胞和在体神经元。Western blot检测证明nNOS蛋白成功表达。一氧化氮浓度检测表明表达的nNOS具有催化活性。结论:慢病毒载体LV-nNOS-GFP构建成功,可以表达功能性全长nNOS蛋白。

• 单位
  南京医科大学