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摘要
目的：采用天然低共熔溶剂（Natural deep eutectic solvents,NADES）提取米糠酯酶并优化提取工艺参数，纯化米糠酯酶获得高纯度米糠酯酶，并探究其酶学特性。方法：合成了10种不同的NADES、选用了水浴搅拌和超声两种处理方式进行筛选，然后对提取效果最佳的NADES和方法进行单因素和响应面优化，参数包括料液比、含水量、提取温度和提取时间；将最优提取工艺得到的粗酶液通过阴离子交换树脂DEAE纯化，然后进行酶学性质的探究。结果：最佳提取米糠酯酶的工艺为在含有5%水分的脯氨酸-甘油（摩尔比1:2）溶剂体系中，水浴搅拌3.0 h，温度74.0℃，米糠和溶剂料液比为9:30，此时米糠酯酶活力为2.96 U。通过阴离子交换树脂DEAE纯化，获得了纯度较高的米糠酯酶，纯化倍数为1.74倍，回收率为69.40%，分子量约为35 kDa，对硝基苯酚乙酯为最适底物，最适温度和pH分别是40.0℃、pH8.0，在30.0～40.0℃和pH7.0～9.0时米糠酯酶均保持良好的稳定性。氯化胆碱-甘油、脯氨酸-甘油两种NADES对米糠酯酶的活力有较好的维持作用。结论：天然低共熔溶剂提取方式是一种简单、绿色的提取方式，可为生物活性化合物的绿色提取研究提供一些参考。
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单位天津科技大学; 广东省农产品加工重点实验室; 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所
