高增殖猪流感重组病毒GX1659/PR8的制备与鉴定

作者：宋祖晨; 孟飞; 张丹丹; 王飞飞; 刘雅茹; 陈艳; 乔传玲; 陈化兰; 杨焕良^*

来源：中国预防兽医学报, 2021, 43(10): 1103-1107.

DOI：10.3969/j.issn.1008-0589.202011048

• H3N2流感病毒
• PR8
• 反向遗传技术
• 生物学特性
• 疫苗株

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8。该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上。每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性。分别利用100 EID50剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID50,绘制其生长曲线。结果显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659。利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析。结果显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异。本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部