PD-S15融合蛋白体外特异性靶向PD-1分子并快速扩增NK/T细胞

作者：王阿香; 李铁鹏; 张放; 王瑶; 杜雪相; 高全立^*

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2019, 26(04): 389-395.

• 程序性死亡受体1
• 白细胞介素-15/白细胞介素-15受体
• PD-S15融合蛋白
• 过继细胞治疗
• 抗原特异性T细胞

目的:探讨anti-PD-1(scFv)/IL-15/IL-15Rα-sushi(简称PD-S15)融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及其对NK/T细胞增殖能力的影响。方法:化学合成人anti-PD-1(scFv)基因和人IL-15/IL-15Rα-sushi融合基因,经过酶切连接构建重组表达质粒pUC57-PD-S15,用LipofectamineTM2000瞬时转染HEK293T细胞,收获细胞培养液上清,用Wb法检测细胞培养液上清中PDS15融合蛋白的表达;用不同配比的PD-S15/X-VIVOTM15培养液对PBMC和TIL分别诱导培养后,用流式细胞术检测PD-S15融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力和对PBMC增殖及CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD3-CD56+各细胞亚群比例的影响;用细胞计数法检测PD-S15融合蛋白对TIL增殖能力的影响。结果:pUC57-PD-S15表达质粒经双酶切和测序验证构建成功并成功转染HEK293T细胞,目标蛋白相对分子质量大约为55 000,符合预期。PD-S15融合蛋白体外具有PD-1特异性结合能力(P<0.05)及NK/T细胞活化增殖能力(P<0.05);与经典TIL培养方案相比,PD-S15培养方案体外活化扩增T细胞的能力更强(P<0.01)。结论:PD-S15融合蛋白体外能够特异性靶向PD-1分子并快速扩增NK/T细胞,为后续从肿瘤组织内或外周血中选择性扩增CD8+PD-1+抗原特异性T细胞奠定了基础。

• 单位
  郑州大学; 河南省肿瘤医院