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摘要
目的在毕赤酵母中表达花烟草植物防御素1(Nicotiala alata defensin 1,NaD1)蛋白,并进行纯化。方法重组表达质粒pPIC9K-NaD1经SacⅠ内切酶线性化后,电转化至感受态毕赤酵母GS115,采用甲醇进行小量诱导表达,选择表达量相对较高的单菌落进行扩大培养,获得大量重组蛋白NaD1,经Ni-NTA亲和层析纯化后,对纯化产物进行15%SDS-PAGE分析及Western blot检测。结果纯化产物相对分子质量约20 000,可与小鼠抗NaD1单克隆抗体发生特异性结合,于相对分子质量约20 000处可见特异性结合条带,蛋白纯度达85%。结论在毕赤酵母中成功表达了NaD1蛋白,纯化后纯度较高,本实验为后续NaD1蛋白杀伤真菌作用机制的研究奠定了基础。
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