苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究

作者：刘旭光; 宋福平; 文思远; 王升启; 黄大昉; 张杰

来源：中国农业科学, 2004, (07): 987-992.

• 寡核苷酸芯片
• 苏云金芽孢杆菌
• cry基因
• 高浓度Klenow片段酶标记法
• 杂交 Oligonucleotide microarray
• Bacillus thuringiensis
• cry genes
• Labeling method of highconcentrationKlenow fragment
• Hybridization

建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50mer、40μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显著性差异(P<0.01),而不同浓度的探针之间没有显著性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg;标记产物杂交用量(0.625～20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在明显的线性关系(r2=0....

• 单位
  连云港师范高等专科学校; 中国农业科学院生物技术研究所; 军事医学科学院; 中国农业科学院植物保护研究所; 放射医学研究所; 植物病虫害生物学国家重点实验室