大容量天然噬菌体抗体库的建立及多样性初步验证

作者：王辉; 黄英; 王琰; 沈倍奋

来源：军事医学科学院院刊, 2008, (04): 305-308+358.

• 噬菌体抗体库
• Cre/LoxP重组系统
• 单链抗体 phage antibody library
• Cre/Loxp system
• single chain antibody

目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库。分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因。结果:抗体V区基因得到有效扩增,...

• 单位
  中国人民解放军海军总医院; 军事医学科学院基础医学研究所