牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

作者：梁彤; 曹存; 王芳; 姜志刚; 于德斌; 徐晓静; 崔久辉; 贾斌; 尹鑫; 常继涛

来源：中国动物传染病学报, 2022, 1-11.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20221123.002

• 牛冠状病毒
• 原核表达
• N蛋白
• 单克隆抗体

为表达牛冠状病毒（BCoV）N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体，将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST，利用大肠杆菌BL21（DE3）表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示，N蛋白主要以可溶性形式表达，分子量约为77 kDa，亲和纯化后纯度为90%。Western blot进一步鉴定发现，重组N蛋白与全病毒多克隆抗体具有良好的反应原性。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠，进行融合、筛选获得3株单克隆抗体，分别命名为1D11、5C2和2B11。细胞上清单抗效价均达1∶320，3株单抗均属IgG亚类，Western blot与IFA鉴定三株单抗与真核表达的N蛋白具有特异性反应。该研究内容为进一步研究N蛋白的结构、功能及建立快速诊断BCoV方法奠定了基础。

• 单位
  黑龙江省农业科学院; 内蒙古农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室