猪脑心肌炎病毒2A蛋白的原核表达与纯化

作者：韩若婵; 梁瑞英; 左玉柱; 萧飒^*; 崔尚金^*

来源：中国畜牧兽医, 2020, 47(11): 3454-3459.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.11.005

• 脑心肌炎病毒(EMCV)
• 2A蛋白
• 原核表达
• 纯化

本试验对猪脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)2A蛋白进行原核表达和纯化。采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原核表达质粒pET28a-EMCV-2A,经PCR和测序鉴定无误。将重组原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,超声破碎后,2A蛋白的表达主要以包涵体形式存在。通过优化蛋白表达条件,使目的蛋白能够实现可溶性表达。利用磁珠纯化方法对重组蛋白进行纯化,并以SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,本试验成功构建2A的重组表达质粒;重组蛋白分子质量约为25 ku,与预期大小一致;IPTG浓度1.0 mmol/L、16℃低温诱导16 h为最佳诱导条件,约有50%的蛋白呈现可溶性表达;纯化后获得2A重组蛋白。本试验通过对EMCV 2A蛋白的原核表达及纯化,成功获得纯度较高的EMCV 2A蛋白,为进一步阐明EMCV的分子致病机制以及研发基因疫苗和抗病毒药物奠定基础。

• 单位
  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 保定职业技术学院; 河北农业大学; 西北农林科技大学