高产高纯度果胶甲酯酶黑曲霉工程菌的构建

作者：韩萌萌; 盖金明; 姜庆丰; 张会; 李杰^*

来源：食品工业科技, 2021, 42(20): 112-118.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020120017

• 果胶甲酯酶
• 黑曲霉
• 背景蛋白
• 分泌表达

为获得一株高产高纯度的果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌,提高果胶甲酯酶的产量,从果胶酶生产菌种中克隆了果胶甲酯酶基因pmeA,通过同源重组的原理,冻融法转化农杆菌、农杆菌介导法转化黑曲霉方法,成功构建了分泌表达果胶甲酯酶的纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeA)。基本发酵培养基中发酵第9 d上清中最高酶活达到467.77 U/mL。进一步敲除重组菌株TH-2(glaA::pmeA)中背景蛋白酸稳定的α-淀粉酶的编码基因asaA,获得纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeA?pyrG?asaA)。该菌株在添加1%的硫酸铵的发酵培养基中培养7 d后,发酵液上清中主要的背景蛋白均消失。但是与纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeA)相比,果胶甲酯酶表达量有所下降,最高酶活为255.40 U/mL。重组果胶甲酯酶的最适作用温度为50℃,适合的温度范围是40～80℃,在80℃下仍能维持其酶活性的70%以上,适合的pH范围是3.0～5.0,最适pH为4.0。最终获得了一株温度和pH作用范围较宽的高产高纯度果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌。

• 单位
  生命科学学院; 东北农业大学