表达兔出血症病毒VP60蛋白的重组兔粘液瘤病毒的构建与初步评价

作者：王媛; 于倩; 李毅; 董衍明^*

来源：生物工程学报, 2020, 36(10): 2083-2091.

DOI：10.13345/j.cjb.200111

• VP60蛋白
• 胸腺激酶基因
• 绿色荧光蛋白
• 同源重组
• 粘液瘤病毒
• 兔出血症病毒

兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)及兔粘液瘤病毒(Myxoma virus,MYXV)分别引起兔出血症(兔瘟)和兔粘液瘤病,是两种严重危害家兔养殖业以及导致原产地欧洲野兔-穴兔(Oryctolagus cuniculus)种群近濒危的重要病原。VP60为构成RHDV衣壳的主要抗原蛋白。为研制能同时免疫预防该两种疫病的重组二联疫苗,本研究分别以MYXV和其复制非必需基因——胸腺激酶(Thymidine kinase,TK)基因为重组载体和同源重组靶基因,构建穿梭载体p7.5-VP60-GFP。将p7.5-VP60-GFP载体转染被MYXV感染的兔肾细胞株RK13,经同源重组后,在荧光显微镜下筛选出表达GFP的重组病毒,并将其命名为rMV-VP60-GFP。通过PCR和Western blotting进行重组病毒vp60基因特异性插入和表达验证结果显示,vp60和gfp基因成功插入MYXV基因组中并且可成功表达,表明成功构建了表达RHDV衣壳蛋白基因vp60的重组MYXV。动物攻毒保护试验表明,制备的重组病毒能保护家兔抵抗MYXV的致死性攻击,这为后续疫苗的研发奠定了基础。

• 单位
  江苏大学; 湖北文理学院; 武汉生物工程学院; 生命科学研究院; 生命科学学院; 湖北大学