内皮素-1对大鼠血管平滑肌细胞一氧化氮及硫化氢体系的影响

作者：田小雨; 张清友; 黄娅茜; 张达; 汤新景; 金红芳; 杜军保; 唐朝枢; 孙燕^*

来源：中华实用儿科临床杂志, 2018, 33(13): 1013-1017.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.13.012

• 内皮素-1
• 一氧化氮
• 硫化氢
• 血管平滑肌细胞
• 大鼠

目的探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(A7r5细胞株)内源性一氧化氮(NO)及硫化氢(H2S)体系的影响。方法将A7r5细胞分为对照组和实验组,在实验组中分别加入浓度为10-8～10-6 mol/L的ET-1,对照组加入等体积的无菌磷酸盐缓冲液(PBS),48 h后分别应用NO和H2S探针原位检测A7r5细胞中NO及H2S水平,分别采用NO测定试剂盒和敏感硫电极法检测细胞上清中NO及H2S水平,应用Western blot法检测A7r5细胞中诱导型一氧化氮合酶(NOS2)、内皮型一氧化氮合酶(NOS3)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、胱硫醚-β-合成酶(CBS)及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果 10-8、10-7及10-6mol/L ET-1处理的A7r5细胞内NO水平的相对荧光强度(0.078±0.080、0. 075±0.002、0. 056±0.009)均低于对照组(0.094±0.061),差异有统计学意义(F=15.248,P <0.05);细胞上清中NO水平[(1.391±0.134)μmol/L、(1.219±0.280)μmol/L、(1.116±0.181)μmol/L]均明显低于对照组[(2.131±0.484)μmol/L],差异有统计学意义(F=20. 833,P <0.01);NOS2 (0.457±0.097、0.462±0. 116、0.438±0.180)明显低于对照组(0.721±0.222),差异有统计学意义(F=6. 196,P <0. 05); NOS3蛋白表达差异无统计学意义(F=2. 669,P> 0. 05)。10-8、10-7、10-6 mol/L ET-1组A7r5细胞内H2S水平的相对荧光强度(0. 063±0. 002、0. 056±0. 008、0. 042±0.009)低于对照组(0.082±0.006),差异有统计学意义(F=16. 297,P <0.01);细胞上清中H2S水平[(19. 961±3. 428)μmol/L、(17. 516±5. 144)μmol/L、(14. 481±4. 885)μmol/L]均明显低于对照组[(29.439±4. 236)μmol/L],差异有统计学意义(F=12. 518, P<0. 01); CBS蛋白表达(0. 359±0. 096、0.270±0.038、0.174±0.051)均低于对照组(0.707±0. 107),差异有统计学意义(F=20. 833,P <0.01),CSE蛋白表达差异无统计学意义(F=0.708,P>0.05)。10-7mol/L ET-1组细胞PCNA表达高于对照组(0.686±0.180比0.437±0.191),差异有统计学意义(t=-2.840,P<0.01)。结论 ET-1刺激可导致血管平滑肌细胞增殖,并使其内源性NO和H2S体系下调。

• 单位
  北京大学第一医院