携带Pyk2基因的shRNA质粒构建及其在Lovo结肠癌细胞系中的表达

作者：胡刚; 汪欣; 郑启军; 万远廉; 刘玉村; 朱静

来源：世界华人消化杂志, 2010, (09): 877-882.

DOI：10.3969/j.issn.1009-3079.2010.09.004

• Pyk2
• 结肠癌
• RNA干扰
• 小发夹RNA
• pGCsi载体 Proline-rich tyrosine kinase 2
• Colon cancer
• RNA Interference
• Small hairpin RNA
• pGCsi vector

目的:构建重组质粒PGCsi-Pyk2shRNA,并检测所引起的Pyk2mRNA和蛋白在Lovo结肠癌细胞系中的表达.方法:设计合成3对Pky2基因shRNA序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子并含有潮霉素B的pGCsi空载体,构建成能产生Pyk2短发卡RNA的质粒;采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列;脂质体介导重组质粒pGCsi-Pyk2shRNA稳定转染Lovo细胞系并通过潮霉素B筛选,获得比较单一的转染细胞;分别采用RT-PCR、Westernblot等检测转染前后Pyk2的水平表达.结果:酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pGCsi-Pyk2shRNA构建无误;绿色荧光照相及...

• 单位
  北京大学第一医院