DOT1L调控胃癌细胞增殖的分子机制

作者：刘雪; 冯晓佳; 张振伟; 钱军^*

来源：山西医科大学学报, 2020, 51(10): 1013-1020.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2020.10.002

• 胃癌
• DOT1L
• 细胞增殖
• MAPK通路
• 生物信息学分析

目的通过生物信息学预测DOT1L基因在胃癌(gastric cancer,GC)中的增殖信号通路,探讨其对胃癌细胞增殖的可能机制。方法从TCGA数据库中下载GC基因表达数据及临床数据,用R语言对数据整理后筛选出差异基因(DEGs)并进行GO功能注释,应用KEGG和GSEA进行富集分析,预测GC增殖可能的信号通路。采用Western blotting方法检测GC细胞株MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-45和AGS中DOT1L的表达。以DOT1L高表达的胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901为后续研究对象,实验分为:对照组(NC)、沉默组(sh DOT1L)和过表达组(oe-DOT1L)。采用real-time PCR检测sh DOT1L组m RNA的沉默效果;通过Western blotting检测sh DOT1L组中DOT1L蛋白和MAPK信号通路相关调控蛋白的表达量;采用细胞集落克隆实验和CCK-8法检测sh DOT1L组和oe-DOT1L组细胞增殖能力。结果与癌旁组织相比,在GC组织中DOT1L表达水平明显升高(P <0.05);运用Kaplan-Meier分析发现GC组织中DOT1L高表达组患者总体生存率(OS)显著降低(P <0.05);富集分析结果显示DOT1L表达升高与MAPK信号通路显著相关(P <0.05)。与对照组比较,sh DOT1L组GC细胞系DOT1L蛋白及m RNA的表达量显著降低(P <0.05),细胞增殖能力均明显减弱(P <0.05);挽救实验结果显示,与sh DOT1L组比较,oe-DOT1L组细胞增殖能力明显恢复(P <0.05); MAPK调控蛋白Erk-p、p-p38MAPK表达量减少,Ki-67表达量增加(P <0.05)。结论 DOT1L基因通过MAPK信号通路调控胃癌细胞的增殖。

• 单位
  蚌埠医学院第一附属医院