乙型肝炎病毒HBx蛋白诱导肝细胞泛素连接酶RNF5抑制STING/IFN-β信号通路的研究

作者：杨凯; 潘颖; 宇芙蓉; 张发苏; 陈谨; 李芳^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(09): 1005-1014.

DOI：10.13350/j.cjpb.220903

• 乙型肝炎病毒
• HBx
• RNF5
• STING/IFN-β信号通路

目的 研究乙型肝炎病毒编码X蛋白(HBx)对HepG2细胞STING/IFN-β信号通路的影响及其可能存在的机制。方法 将含HBV全基因组1.5倍复制子质粒pHBV-48和缺失HBV X基因的HBV复制子质粒pHBV-48-X0分别转染至HepG2细胞，采用细胞免疫荧光染色法观察细胞内HBx蛋白表达情况，同时采用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞内干扰素基因刺激因子(STING)基因表达水平及蛋白含量。分别转染空载体pEGFP-N1和HBV编码X基因表达质粒pEGFP-HBx至HepG2细胞，采用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞内STING及环指蛋白5(RNF5)基因和蛋白含量。采用基因干扰技术减少转染质粒的HepG2细胞RNF5表达，Western blot检测细胞STING、干扰素β(IFN-β)蛋白表达情况；以不同浓度蛋白酶抑制剂MG132处理转染pEGFP-HBx的HepG2细胞，Western blot检测细胞内STING、IFN-β蛋白表达情况。结果 转染空载体、pHBV-48及pHBV-48-X0的HepG2细胞STING基因相对含量差异无统计学意义(P>0.05);转染空载体的HepG2细胞STING蛋白(1.14±0.11)相对表达水平较转染pHBV-48的HepG2细胞(0.47±0.09)显著升高(P<0.01),但低于转染pHBV-48-X0的HepG2细胞(2.15±0.18)(P<0.01)。转染空载体及pEGFP-HBx的HepG2细胞STING基因相对含量差异均无统计学意义(均P>0.05),但转染pEGFP-HBx的HepG2细胞STING蛋白(0.48±0.16)相对含量较转染空载体的细胞(0.87±0.22)显著降低(P<0.01);与转染空载体的HepG2细胞相比，转染pEGFP-HBx的HepG2细胞RNF5基因相对表达水平及蛋白相对含量均显著升高(均P<0.01)。减少HepG2细胞RNF5表达后，细胞内STING和IFN-β相对蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。随着蛋白酶抑制剂MG132浓度逐渐升高，表达HBx的HepG2细胞内STING和IFN-β蛋白相对含量逐渐上升。结论 乙型肝炎病毒可能通过病毒编码蛋白HBx上调肝细胞泛素连接酶RNF5进而抑制STING/IFN-β信号通路。

• 单位
  安徽医学高等专科学校