自噬相关基因LC3-I的基因表达及单克隆抗体的制备

作者：赵勇; 李羽; 伍静; 张彩勤; 白冰; 毛峰峰; 师长宏; 张海

来源：现代生物医学进展, 2013, (24): 4601-4604.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2013.24.001

• LC3-I
• 原核表达
• 抗体
• 单克隆 LC3-I
• Prokaryotic expression
• Autophagy
• Monoclonal antibody

目的:通过克隆LC3-I基因,体外原核表达LC3-I蛋白后制备抗LC3单克隆抗体,作为自噬研究中的标记分子检测自噬的发生和发展过程。方法:RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆LC3基因,亚克隆至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术,制备分泌抗LC3-I杂交瘤细胞株,体内诱生腹水制备mAb,间接ELISA法测定其效价,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。结果:成功克隆了LC3-I基因,并对其在E.coli DH5α进行诱导表达,SDS...

• 单位
  第四军医大学