ABL酪氨酸激酶及突变体蛋白ABLT315I的分离纯化及活性鉴定

作者：刘素晓; 王幼平; 崔琳; 刘卫红; 沈思; 邢作英

来源：中国生化药物杂志, 2015, 35(08): 19-22.

• 慢性粒细胞白血病
• ABL蛋白
• 酪氨酸激酶
• 药物筛选

目的建立一种简单、稳定、高效分离纯化ABL酪氨酸激酶及其突变体ABLT315I的方法。方法 abl及其定点突变基因插入p ET-28a载体后,与p GEX6P-1-ptp-1b共同转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中进行培养,加入异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导ABL酪氨酸激酶及其突变体的表达,亲和层析和凝胶过滤层析纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度与相对分子量,BCA法测定蛋白浓度,ATP/NADH偶联法测定蛋白激酶活性。结果 SDS-PAGE显示ABL及ABLT315I蛋白具有很高的纯度,并且其浓度分别达到28 mg/L(LB菌液)和20 mg/L(LB菌液)。2种目的蛋白在体外均测得了很好的酪氨酸激酶活性。结论本研究成功建立了一种稳定、简单高效的ABL蛋白及其突变体的分离纯化方法,为后续蛋白进行高通量药物筛选和结构分析建立良好的基础。

• 单位
  中心实验室; 河南中医学院第一附属医院