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摘要
目的研究牛磺酸对宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)胎鼠神经干细胞(NSCs)增殖及Ras同源基因A(RhoA)、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)Ⅱ表达的影响。方法采用低蛋白饮食法建立IUGR胎鼠模型。取胎鼠室管膜下生发基质区(SVZ)脑组织进行NSCs培养。将所得NSCs分为5组:正常对照组(Ⅰ组)、IUGR组(Ⅱ组)、IUGR+牛磺酸组(Ⅲ组)、IUGR+ROCK阻断剂组(Ⅳ组)、IUGR+牛磺酸+ROCK阻断剂组(V组)。采用免疫荧光法检测各组脂肪酸结合蛋白7(FABP7)阳性细胞数;实时荧光定量PCR法检测各组细胞RhoA、ROCKⅡmRNA水平;采用Western blot法检测各组细胞RhoA、ROCKⅡ蛋白水平。结果 1.以Ⅰ组为标准计数,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、V组FABP7阳性细胞计数比例分别为(100.0±1.6)%、(63.8±5.2)%、(82.8±4.3)%、(78.6±2.7)%、(87.6±3.2)%,Ⅱ组较Ⅰ组减少约36%,差异有统计学意义(t=14.98,P<0.01);Ⅱ组、Ⅳ组、Ⅲ组、V组FABP7阳性细胞数呈逐渐增加趋势,组间比较差异有统计学意义(F=66.53,P<0.01)。2.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、V组RhoA mRNA表达水平分别为1、3.05±0.36、2.15±0.19、1.89±0.11、1.66±0.11,ROCKⅡmRNA表达水平分别为1、2.78±0.27、2.12±0.21、1.74±0.12、1.53±0.12,Ⅱ组RhoA及ROCKⅡmRNA水平均较Ⅰ组显著增加(t=-12.61、-14.67,均P<0.01),Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、V组中RhoA及ROCKⅡmRNA的表达呈逐渐下降趋势,组间比较差异均有统计学意义(F=73.20、76.38,均P<0.01)。3.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、V组RhoA蛋白相对表达分别为0.37±0.03、0.87±0.02、0.73±0.04、0.72±0.04、0.55±0.04,ROCKⅡ蛋白相对表达分别为0.46±0.03、0.96±0.02、0.74±0.01、0.63±0.02、0.55±0.03,Ⅱ组RhoA及ROCKⅡ蛋白水平较Ⅰ组均显著增加(t=-27.60、-35.77,均P<0.01);Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组中ROCKⅡ蛋白的表达呈逐渐下降趋势,组间比较差异有统计学意义(F=390.16,P<0.01);RhoA蛋白在Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅴ组中的表达呈逐渐下降趋势,组间比较差异有统计学意义(F=130.51,P<0.01),Ⅲ组及Ⅳ组间比较,差异无统计学意义(t=0.46,P>0.05)。结论牛磺酸可能通过抑制Rho/ROCK信号通路促进IUGR胎鼠NSCs增殖,从而改善其脑发育。
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