E75K突变对中心蛋白与Tb（Ⅲ）/Ca（Ⅱ）作用的影响

作者：赵亚琴^*; 刘旭荣

来源：山西大学学报(自然科学版), 2023, 46(04): 897-902.

DOI：10.13451/j.sxu.ns.2022059

• 中心蛋白
• 光谱
• 3+/Ca2+" name="keyword">Tb3+/Ca2+
• 离子结合

中心蛋白(centrin)是高度保守EF-hand超家族成员，蛋白的N端结构域与C端结构域之间可能存在协同性，那么位于蛋白N端结构域的EF-hand结构基元丧失金属离子结合能力后是否会对蛋白C端结构域的金属离子结合特性产生影响？本文利用分子生物学方法将八肋游仆虫中心蛋白(Euplotes octocarinatus centrin, EoCen)的75位谷氨酸(E)突变为赖氨酸(K)得到EoCen-E75K，通过荧光光谱法、等温滴定量热法、远紫外圆二色光谱及紫外-可见吸收光谱等方法研究了EoCen-E75K与Tb3+/Ca2+的结合。结果表明，突变体蛋白EoCen-E75K与Tb3+/Ca2+的结合比为1∶3。参与金属离子配位的E突变为带相反电荷的K，改变蛋白质EF-hand结构域的静电平衡，使其丧失与金属离子的结合，Tb3+/Ca2+结合在蛋白EF-handⅠ、Ⅲ、Ⅳ位点。突变使得EoCen蛋白Ⅲ、Ⅳ位点与Tb3+的结合能力降低10～100倍。另外，E突变为K后EoCen的二级结构没有明显改变，疏水结构的外露程度减弱。

• 单位
  山西大学