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摘要
目的 考察苔黑酚葡萄糖苷对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导成骨细胞损伤的保护作用，并探讨其调控机制。方法 从新生小鼠颅盖骨提取并培养原代成骨细胞(osteoblast,OB)，用DEX(1μmol·L-1)诱导成骨细胞损伤为模型。采用CCK-8法测定不同浓度苔黑酚葡萄糖苷及有无DEX干预下对成骨细胞增殖的影响；采用试剂盒进行成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测定；采用茜素红S染色观察骨矿化结节的形成；采用Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况；采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察细胞内糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的入核情况；采用Western blot法检测GR在细胞核、细胞质和全细胞中的蛋白表达，以及细胞中成骨特征蛋白CollagenⅠ、Runx2、Osterix(Osx)和Dlx5的表达。结果 与对照组相比，DEX组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显降低(P<0.05、0.01)，细胞凋亡明显升高(P<0.01)；与模型组相比，苔黑酚葡萄糖苷组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显升高(P<0.01)，细胞凋亡明显降低(P<0.05)。与对照组相比，DEX组成骨细胞中GR在核内的表达明显升高(P<0.01)，而GR在全细胞和细胞质中的表达明显降低(P<0.01)，同时成骨特征蛋白表达也明显降低(P<0.01)；与模型组相比，苔黑酚葡萄糖苷组GR在成骨细胞核内的表达明显降低(P<0.01)，而GR在全细胞和细胞质中的表达明显升高(P<0.01)，成骨特征蛋白的表达均明显升高(P<0.01)，且呈剂量依赖关系。结论 苔黑酚葡萄糖苷能够改善DEX诱导的成骨细胞增殖、分化和矿化的抑制作用，并减少其凋亡，其作用机制与苔黑酚葡萄糖苷抑制GR入核，从而调控成骨相关蛋白表达有关。
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