重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质

作者：张云康; 高兴; 汪德健; 王富军; 赵健

来源：华东理工大学学报, 2011, (04): 458-463.

DOI：10.14135/j.cnki.1006-3080.2011.04.003

• 肝素黄杆菌
• 谷胱甘肽-S-转移酶
• 肝素酶Ⅰ
• 融合表达
• 亲和纯化 Flavobacterium heparinum
• glutathione-S-transferase(GST)
• heparinase I
• fusion expression
• affinity chromatography

肝素酶Ⅰ(HeparinaseⅠ,HepⅠ)是一种多糖裂解酶,可特异性裂解硫酸肝素分子中糖苷键以制备低分子质量肝素(LMWH)。由于重组肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中表达时极易形成包涵体,将肝素酶Ⅰ基因的N端融合谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签,在大肠杆菌中进行低温表达。结果显示,约90%的GST-HepⅠ融合蛋白以可溶性形式表达,表达的目标蛋白粗酶经过一步亲和纯化,比活为124.7 U/mg,纯化倍数达到366.7倍,酶活回收率为31.0%;结果表明Ca2+对重组GST-HepⅠ有很强的激活作用,GPC-HPLC结果显示重组GST-HepⅠ与天然肝素酶Ⅰ裂解图谱相同。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学; 上海中医药大学