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摘要
目的:构建稳定表达CD123-CLL1的慢病毒载体及急性髓系白血病细胞株,为研究CD123、CLL-1在白血病中的作用及以CD123和CLL-1为靶点的治疗方法提供一种体外模型。方法:通过合成CD123及CLL-1序列及PCR同源重组的方式构建慢病毒重组质粒,通过3质粒包装系统对慢病毒质粒载体进行包装,收集慢病毒上清液后采用定量PCR法测定病毒滴度。收集白血病K562细胞株,使用病毒上清液对其进行感染,通过嘌呤霉素筛选以获得稳定表达目的基因的白血病细胞系,采用RT-PCR和流式细胞术检测CD123和CLL-1的表达水平。结果:经琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定,成功构建了慢病毒载体,且经过定量PCR法检测显示,收集后的病毒上清液病毒滴度高达5.81×108 IU/ml。白血病K562细胞株经过感染及通过嘌呤霉素分选后获得阳性表达细胞系,RT-PCR法证实CD123和CLL-1的m RNA高表达,流式细胞术证实了CD123及CLL-1的表达明显高于对照细胞。结论:成功构建了表达CD123-CLL-1的慢病毒载体,同时成功获得了能够稳定表达CD123及CLL-1的K562白血病细胞株。
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单位徐州医科大学; 淮安市第二人民医院; 苏州大学附属第一医院
