PRRSV抑制仔猪免疫细胞的抗氧化能力及其机制的初步研究

作者：陈奇; 郝祝兵; 罗梦圆; 王秋华; 刘明妍; 施君; 胡庭俊; 韦英益^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z4: 3518-3527.

DOI：10.13417/j.gab.040.003518

• PRRSV
• 仔猪脾细胞
• 抗氧化能力
• 组蛋白乙酰化

本试验旨在研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)体外感染仔猪脾细胞后对细胞抗氧化能力的影响及其可能机制。无菌分离仔猪脾组织获得脾细胞后进行体外培养并进行PRRSV感染，MTT法和荧光探针法分别测定细胞存活率和细胞内ROS水平；采用试剂盒检测细胞GSH、GSSG、XOD、MPO、iNOS、HAT和HDAC的活性；免疫印迹法检测细胞组蛋白H3和H4乙酰化水平。结果显示，101～104TCID50 PRRSV感染后细胞存活率明显下降，其中104TCID50 PRRSV组细胞存活率极显著降低(P <0.01)，筛选103TCID50 PRRSV作为后续实验病毒感染稀释度；感染后8 h、12 h和24 h,102～104TCID50 PRRSV组细胞内ROS分泌水平升高，与对照组细胞相比差异极显著(P <0.01)，表明病毒感染后可导致细胞氧化损伤。103TCID50 PRRSV感染细胞后，细胞的GSH和GSSG水平在不同时间点均升高，且GSH/GSSG在感染后12h极显著低于细胞对照组(P <0.01);XOD、MPO、iNOS水平在各个时间点均高于对照组，在病毒感染后12h时，与对照组比较差异极显著(P <0.01)，表明PRRSV感染后导致细胞氧化应激；而用H2O2处理细胞后进行PRRSV感染，与对照组比较，H2O2+病毒感染组细胞抗超氧阴离子活力和抑制羟自由基能力均显著下降(P <0.05)，且病毒感染组细胞的抑制羟自由基能力也显著下降(P <0.05)，表明在活性氧条件下，PRRSV感染后细胞抗氧化能力显著降低，而且病毒感染组和H2O2+病毒感染组细胞的HAT和HDAC活性显著升高(P <0.05)，细胞组蛋白Ace-H3和Ace-H4水平显著升高(P <0.05)，表明病毒感染后细胞内HAT和HDAC活性的平衡失调，且组蛋白Ace-H3和Ace-H4乙酰化水平升高。研究表明，PRRSV感染会导致免疫细胞氧化应激状态和抗氧化能力下降，尤其是细胞处在活性氧条件下，其机制可能与细胞内HAT和HDAC活性平衡状态被打破，组蛋白Ace-H3和Ace-H4表现出更高的乙酰化水平有关。

• 单位
  广西百色农业学校; 广西大学