AGEs和TNF-α对人牙周膜干细胞骨向分化能力的协同抑制作用

作者：杨晓红; 杨琨; 崔晓霞; 刘琪^*; 金岩^*

来源：基因组学与应用生物学, 2018, 37(12): 5648-5653.

DOI：10.13417/j.gab.037.005648

• 糖基化终末产物
• 肿瘤坏死因子
• 人牙周膜干细胞
• 骨向分化

本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对其进行干细胞鉴定后,取第3代人牙周膜干细胞在100μg/mL AGE-BSA及10 ng/mL TNF-α刺激下进行增殖能力检测;同时矿化诱导,设A组(AGE-BSA刺激组),T组(TNF-α刺激组),AT组(AGE-BSA/TNF-α共同刺激组),不含AGE-BSA/TNF-α的常规矿化诱导组作为对照;于诱导的21d茜素红染色观察钙结节形成情况,诱导7 d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real time PCR)和Western blotting检测成骨相关基因及蛋白表达情况。流式细胞仪显示细胞阳性表达STRO-1、CD146、CD44、CD90;成骨诱导21 d后茜素红染色和定量分析显示,AT组骨结节形成量最低,A组及T组相对于对照组骨结节形成量存在下降;差异均有统计学意义(p<0.05)。成骨诱导7 d后ALP染色,ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同。成骨诱导7 d后RT-PCR检测成骨相关基因BSP、OCN、ALP mRNA表达,AT组表达水平最低,A组及T组有下降趋势,差异均有统计学意义(p<0.05)。Western blotting检测显示,各组总蛋白BSP蛋白表达趋势与RT-PCR趋势相同。AGEs与TNF-α均具有对HPDLSC的骨向分化能力的抑制作用,两者共同刺激对HPDLSC骨向分化能力存在协同抑制作用。

• 单位
  军事口腔医学国家重点实验室; 遵义医学院附属口腔医院; 第四军医大学