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摘要
近年来以猪(Sus scrofa)胚胎为材料的科学研究和动物生产快速发展,胚胎需求量增大,而猪胚胎、配子冷冻保存不成熟,体外受精胚胎发育率低,容易出现多精受精,因此需要建立一套快捷、高效的猪体外生产健康胚胎的技术体系。本研究集成并优化了猪精液冷冻、卵母细胞成熟和卵母细胞胞质单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术,建立了一套体外高效生产猪胚胎的技术体系。首先建立了稳定的猪卵母细胞成熟体系,其孤雌激活胚胎卵裂率和囊胚发育率分别为79.51%和32.30%。然后利用新鲜精液和冷冻精液进行体外受精(in vitro fertilization,IVF),胚胎卵裂率分别为49.89%和28.30%,囊胚发育率分别为31.44%和10.55%。利用新鲜精液进行IVF获得的胚胎卵裂率和囊胚发育率均明显高于冷冻精液(P<0.05)。进一步进行了ICSI实验,卵母细胞胞质注射冷冻精子单精子体外生产的猪胚胎卵裂率、囊胚发育率分别为83.00%和23.32%,而新鲜精液常规IVF受精卵卵裂率、囊胚发育率分别为49.89%和31.44%。ICSI胚胎囊胚发育率低于新鲜精液IVF受精卵和卵母细胞孤雌激活胚胎的囊胚发育率,但对于总体囊胚获得率,卵母细胞胞质注射冷冻精子体外生产猪胚胎明显高于新鲜精液IVF方法。研究工作为科研和生产所需猪健康胚胎提供了有效的、廉价的制备技术体系。
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