鲤鱼重组IL–17N的原核表达条件优化及蛋白纯化

作者：张磊; 唐永凯; 李红霞; 徐逾鑫; 李迎宾; 俞菊华^*

来源：湖南农业大学学报(自然科学版), 2020, 46(03): 364-369.

DOI：10.13331/j.cnki.jhau.2020.03.017

• 鲤鱼
• 白细胞介素17N
• 原核表达
• 重组蛋白
• 融合标签
• 蛋白纯化

为获得可溶的鲤鱼IL–17N重组蛋白,构建原核重组表达质粒GST–17N、SUMO–GST–17N和MBP–17N,确定IL–17N的最适促溶标签,并优化其诱导表达条件(诱导剂异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、诱导时间和诱导温度)。结果:成功构建了鲤鱼IL–17N原核重组表达载体GST–17N、SUMO–GST–17N和MBP–17N;融合标签MBP、SUMO–GST和GST的促溶效果依次降低,SUMO–GST–17N、MBP–17N上清蛋白占总蛋白比例分别为47.4%、87.0%;MBP–17N的最佳表达条件为0.5 mmol/L IPTG,25℃诱导8～12 h;经过镍柱纯化,获得可溶MBP–17N蛋白,每克总菌约获得0.09 mg MBP–17N蛋白。

• 单位
  南京农业大学; 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心